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項目介紹

細(xì)胞克隆形成率即細(xì)胞接種存活率，是測定單個細(xì)胞增殖能力的有效方法，指單個細(xì)胞在體外持續(xù)增殖6代以上其后所形成的細(xì)胞群，形成肉眼可見的克隆，通過計數(shù)得出克隆形成率，可對受檢細(xì)胞的增殖潛力作定量分析，可以反映細(xì)胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。常用方法有平板克隆形成和軟瓊脂克隆形成。常用于抗腫瘤藥物敏感性測定、基因治療、腫瘤放射生物學(xué)等方面的研究。

樣品要求

1、平板克隆形成試驗方法簡單，適用于貼壁生長的細(xì)胞（細(xì)胞生長快慢均可）。適宜底物為玻璃的、塑料瓶皿。

2、軟瓊脂培養(yǎng)克隆形成試驗適用于懸浮生長的細(xì)胞以及繁殖較快的貼壁細(xì)胞。

3、請?zhí)顚懲暾蜆訂位蛱峁┰敿?xì)的實驗方案。


項目案例

光學(xué)顯微鏡下的克隆細(xì)胞

克隆形成原始圖

常見問題
1、克隆形成的目的？

1）通過對細(xì)胞處理后在細(xì)胞培養(yǎng)板上的克隆形成能力來提示處理后細(xì)胞的增殖能力。

2）評價不同殺傷因素(藥物、基因等)對腫瘤細(xì)胞增殖能力或群體依賴性的敏感性;

3）評價細(xì)胞在體內(nèi)成瘤性，癌細(xì)胞不一定都可以在體內(nèi)成瘤，但若體外克隆能力越強(qiáng)，即表明體內(nèi)成瘤性越強(qiáng)，算是一種模擬體內(nèi)成瘤的體外實驗。

2、克隆形成的分類？

克隆形成依據(jù)采用的培養(yǎng)介質(zhì)的不同，分為平板克隆和軟瓊脂克隆兩類。

1. 平板克隆形成（Colony formation）：細(xì)胞培養(yǎng)在培養(yǎng)基中，應(yīng)用于貼壁的細(xì)胞。

2. 軟瓊脂克隆形成（soft agar colony formation）：細(xì)胞被瓊脂糖掛起來，主要應(yīng)用于懸浮的腫瘤細(xì)胞和轉(zhuǎn)化細(xì)胞系。

3、2種細(xì)胞克隆方式，如何選擇？

根據(jù)實驗對象和目的選擇，平板克隆檢測貼壁腫瘤細(xì)胞的增殖能力和致瘤性，軟瓊脂克隆形成實驗除了檢測貼壁細(xì)胞，還能檢測懸浮腫瘤細(xì)胞和轉(zhuǎn)化細(xì)胞系，具有平板克隆不可取代的優(yōu)勢。若只是簡單評價貼壁細(xì)胞的增殖能力和群體依賴性，則選擇平板克隆即可。

克隆形成

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