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項目介紹

單細胞凝膠電泳是檢測DNA損傷快速、簡便、敏感、經(jīng)濟的方法，因其細胞電泳形狀頗似彗星，又稱彗星試驗（cometassay）。

技術(shù)原理：基于有核細胞的DNA分子量很大，在DNA超螺旋結(jié)構(gòu)附著在核基質(zhì)中，用瓊脂糖凝膠電泳將細胞包埋在載玻片上，在細胞裂解液作用下，細胞膜、核膜及其他生物膜破壞，使細胞內(nèi)的RNA、蛋白質(zhì)及其他成分進入凝膠，繼而擴散到裂解液中，唯獨核DNA仍保持纏繞的環(huán)區(qū)附著在剩余的核骨架上，并留在原位。如果細胞未受損傷，電泳中核DNA因其分子量大而停留在核基質(zhì)中，經(jīng)熒光染色后呈現(xiàn)圓形的熒光團，無拖尾現(xiàn)象。若細胞受損，在堿性電泳液（PH>13中），先是DNA雙鏈解螺旋且堿變性為單鏈，單鏈斷裂的碎片分子量小即可進入凝膠中，在電泳時斷鏈或碎片離開DNA向陽極遷移，形成拖尾。細胞核DNA損傷損傷愈重，產(chǎn)生的斷鏈或堿易變性片段就愈多，其斷鏈或短片也就愈小，在電場作用下遷移的DNA量多，遷移的距離長，表現(xiàn)為尾長增加和尾部熒光強度增強。因此，通過測定DNA遷移部分的光密度或遷移長度就可定量測定單個細胞DNA損傷程度。目前用于彗星試驗的細胞主要有兩大類：原位生物細胞和哺乳動物細胞。

樣品要求

1、細胞樣本：每個檢測樣本需提供5*10^5細胞量。

2、新鮮組織樣本：需要24h內(nèi)，4℃運輸?shù)竭_實驗室。

項目案例

學(xué)術(shù)文章

17

2025/06

單細胞凝膠電泳實驗（彗星實驗?）的應(yīng)用與試驗基本步驟

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