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冷凍傳輸掃描電鏡Cryo-SEM的技術(shù)原理與操作
來源: 時間:2025-01-02 09:24:58 瀏覽:4205次

冷凍傳輸掃描電鏡Cryo-SEM的技術(shù)原理與操作

 

冷凍傳輸掃描電鏡(Cryo-SEM是一種高級的材料分析技術(shù),它結(jié)合了低溫樣品制備與掃描電子顯微鏡(SEM的高分辨率成像能力,特別適用于觀察那些在常規(guī)條件下會變形或蒸發(fā)的樣品,如生物組織、液體、半液體以及對電子束敏感的材料。

技術(shù)原理

1. 冷凍固定

Cryo-SEM的核心在于快速冷凍樣品,以保持其自然狀態(tài)。這通常通過高壓冷凍或液氮泥快速冷凍實現(xiàn)。高壓冷凍利用液氮在高壓下將樣品迅速冷凍至玻璃態(tài),避免了水分結(jié)晶對樣品結(jié)構(gòu)的破壞。液氮泥則是通過在真空環(huán)境中使液氮不沸騰,形成“泥漿”狀,快速冷凍樣品,確保結(jié)構(gòu)的完整性。

2. 冷凍傳輸系統(tǒng)

為了保持樣品的低溫狀態(tài),冷凍傳輸系統(tǒng)至關(guān)重要。它包括一系列低溫裝置,如氣鎖室、冷凍臺和防污染器,確保樣品從制備到成像過程中不經(jīng)歷溫度變化,防止冰晶形成和樣品污染。

3. 樣品制備

冷凍斷裂:冷凍后的樣品在低溫下斷裂,暴露新鮮表面。

升華:在真空環(huán)境下,使用低溫條件去除樣品表面的冰,保留樣品結(jié)構(gòu)。

導(dǎo)電性噴涂:為了提高成像質(zhì)量,會在樣品表面噴涂一層導(dǎo)電材料,如鉑或金,減少充電效應(yīng)。

4. 成像

樣品通過冷凍傳輸裝置移至Cryo-SEM的冷臺上,溫度可低至-160°C,然后在低溫下進(jìn)行電子束掃描,獲得高分辨率圖像。

操作流程

1. 樣品準(zhǔn)備:選擇合適的冷凍方法,確??焖倮鋬鲆员苊饨Y(jié)構(gòu)損傷。

2. 冷凍固定:使用高壓冷凍儀或液氮泥快速冷凍樣品,保持其原始結(jié)構(gòu)。

3. 轉(zhuǎn)移與斷裂:將冷凍樣品轉(zhuǎn)移到冷凍制備室,進(jìn)行冷凍斷裂,以獲得內(nèi)部結(jié)構(gòu)的暴露面;在必要時,進(jìn)行表面處理,如升華去除表面冰層。

4. 導(dǎo)電噴涂:在冷凍狀態(tài)下,對樣品表面進(jìn)行導(dǎo)電材料的噴涂,以利于電子束的均勻散射。

5. 冷凍傳輸:利用專門的冷凍傳輸裝置,在低溫和真空條件下將樣品安全轉(zhuǎn)移到SEM的冷臺上,確保過程中樣品不受熱影響。

6. SEM成像:在Cryo-SEM中調(diào)整電子束參數(shù),如電壓、電流和工作距離,以適應(yīng)低溫條件下的成像;進(jìn)行掃描,獲取高清晰度的冷凍狀態(tài)下的樣品圖像。

應(yīng)用實例

Cryo-SEM廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、材料科學(xué)、納米技術(shù)等領(lǐng)域。例如,觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)、研究藥物遞送系統(tǒng)的形態(tài)、分析復(fù)合材料的微觀結(jié)構(gòu)等。通過Cryo-SEM,科學(xué)家能夠捕捉到生物樣本的瞬間狀態(tài),如細(xì)胞膜的細(xì)節(jié)、病毒的結(jié)構(gòu),或是液體乳化劑的微觀相態(tài),這些在常溫下難以觀察到的細(xì)節(jié)。

安全與維護(hù)

操作Cryo-SEM時需注意低溫防護(hù),避免液氮凍傷,并確保所有操作都在通風(fēng)良好的環(huán)境下進(jìn)行,以防止氮氣積聚。定期維護(hù)冷凍傳輸系統(tǒng),確保其性能穩(wěn)定,是保證成像質(zhì)量的關(guān)鍵。

 

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全部 3小時前 四川
文字是人類用符號記錄表達(dá)信息以傳之久遠(yuǎn)的方式和工具?,F(xiàn)代文字大多是記錄語言的工具。人類往往先有口頭的語言后產(chǎn)生書面文字,很多小語種,有語言但沒有文字。文字的不同體現(xiàn)了國家和民族的書面表達(dá)的方式和思維不同。文字使人類進(jìn)入有歷史記錄的文明社會。
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