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熒光定量PCR的優(yōu)點和檢測方法盤點

來源：測試GO 時間：2022-11-03 11:37:47 瀏覽：4342次

熒光定量PCR檢測有以下優(yōu)點：

1.高靈敏性：可檢測單個細胞基因；

2.高特異性和精確性：將DNA雜交的高特異性和光譜技術(shù)的高精準性融合，應(yīng)用熒光探針和光電傳導(dǎo)，直接探測基因擴增過程中熒光信號的變化，以獲得定量結(jié)果，相當于在PCR反應(yīng)過程中自動完成了Northern雜交；

3.操作簡便、速度快：通過計算機和分析軟件實現(xiàn)PCR擴增、產(chǎn)物檢測和定量分析一體化；

4.安全、無污染：FQ-PCR在全封閉狀態(tài)下進行PCR擴增和產(chǎn)物分析，杜絕了傳統(tǒng)PCR開放檢測對環(huán)境的污染和由此導(dǎo)致的假陽性；

5.結(jié)果觀測重復(fù)性好：一起在線實時觀測，結(jié)果判斷直觀，避免人為因素干擾。

內(nèi)參基因ACTIN(溶解曲線)

熒光定量PCR檢測的兩種方法：

1.SYBR GreenⅠ法：

在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。

2.TaqMan探針法：

探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成完全同步。

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