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SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳用途分析以及測試中常見問題

來源：測試GO 時間：2022-11-03 10:20:43 瀏覽：8037次

SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳因為操作簡單，所以具有廣泛的用途。SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳是許多研究領(lǐng)域的重要的分析技術(shù)。

cas12a蛋白聚丙烯酰胺凝膠電泳和蛋白質(zhì)免疫印記結(jié)果

SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳用途：

1.蛋白質(zhì)純度分析；

2.蛋白質(zhì)分析量的測定，根據(jù)遷移率大小測定蛋白質(zhì)亞基的分子量；

3.蛋白質(zhì)濃度的測定；

4.蛋白質(zhì)水解的分析；

5. 免疫沉淀蛋白的鑒定；

6.免疫印跡的第一步；

7.蛋白質(zhì)修飾的鑒定；

8.分離和濃縮用于產(chǎn)生抗體的抗原；

9.分離放射性標記的蛋白質(zhì)；

10.顯示小分子多肽。

SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳有效分離范圍取決于聚丙烯酰胺的濃度和交聯(lián)度，其孔徑隨著雙丙烯酰胺與丙烯酰胺比率的增加而減小，比率接近于1：20時，孔徑達到最小值。分子量低于10kD的小分子肽類，即使用較高濃度的聚丙烯酰胺凝膠的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳也不能完全分離，或是顯不出色，或是顯帶較弱，帶型彌散。且分子量越小，效果也越差。

為了能在SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳上顯示測定小分子量的多肽，通常采取兩種方法：一是增加凝膠的濃度和交聯(lián)度，在制膠時加入一些可以降低聚丙烯酰胺凝膠網(wǎng)限孔徑的溶質(zhì)分子，使用尿素、甘油或蔗糖等物質(zhì)；二是選擇緩沖液中的拖尾離子的種類和濃度以達到改善多肽的分離效果

SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳測試的常見問題：

Q1、如何讀取SDS-PAGE結(jié)果

電泳后肉眼無法觀察到蛋白分離，需要后續(xù)的染色技術(shù)?？捡R斯亮藍染色和銀染是常規(guī)檢測和定量電泳分離蛋白質(zhì)的常用方法。經(jīng)過固定-染色-脫色等簡單處理后，可以清楚的觀察到蛋白質(zhì)的分布。

Q2、如何儲存SDS-PAGE凝膠

通常在每次實驗之前準備新鮮的SDS-PAGE凝膠。然而凝膠也可以在4℃的清水的儲存約一周。如果凝膠染色后不能及時拍照，則需要將其放入水中，以防止凝膠干燥和收縮。建議盡快拍攝染色結(jié)果，如果凝膠長時間浸泡在水中，條帶會散開。

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